processo de extração de silymarin
Silimarina, uma mistura de flavonolignans que exibem muitas atividades farmacológicas, é obtida a partir das frutas do cardo de leite (Silybum marianum L. Gaertner). Devido ao alto teor lipídico em frutas de cardo, a Farmacoeia Europeia recomenda um processo de duas etapas de sua extração. Primeiro, as frutas são desgorduradas por 6 h, usando n-hexano; segundo, silymarin é extraído com metanol por mais 5 horas.
Os dados apresentados mostram que este processo de extração tradicional de Soxhlet extremamente longo pode ser encurtado para alguns minutos usando extração líquida pressurizada (PLE). O PLE também permite eliminar o estágio de desgordurante necessário no procedimento tradicional, simplificando assim o procedimento de extração de silymarin e prevenindo a perda de silymarin causada pela desgordura. As recuperações PLE obtidas sob as condições de extração otimizadas são claramente melhores do que as obtidas pelo procedimento de extração soxhlet recomendado pela Pharmacopoeia.
Os rendimentos ple de silychristin, silydianin, silybin A, silybin B, isosilybin A e isosilybin B em acetona são 3.3, 6.9, 3.3, 5.1, 2.6 e 1,5 mg/g das frutas não desonram, respectivamente. A extração de Soxhlet de 5 h com metanol em frutas desfatadas dá apenas ∼72% da quantidade de silymarin obtida em 10 min PLE a 125°C.
O que é Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, comumente chamado decardo de leite, cardo de leite abençoado, Marian Thistle, Mary Thistle ou St Mary's Thistle, é uma planta anual ou semestral da família Asteraceae. A planta, originalmente crescendo no sul da Europa e ásia, agora é encontrada em todo o mundo (1). Esta erva problemática é atualmente cultivada como uma planta medicinal e é uma das culturas medicinais mais importantes da Europa.
O cardo de leite tem sido usado para fins medicinais há mais de 2000 anos, mais comumente para o tratamento de doenças hepáticas (cirrose e hepatite), bem como para a proteção do fígado contra substâncias tóxicas (2-5). O interesse recente da pesquisa nesta planta tem sido estimulado por estudos que mostram sua atividade antitumoral excepcionalmente alta. Os extratos da planta estão agora em estudo intenso na quimioprevação experimental do câncer, e na amenização dos efeitos colaterais da quimioterapia (6). Relatórios recentes demonstraram que extratos dessa planta também são caracterizados por muitas outras atividades farmacológicas, como efeitos anti-inflamatórios e antifibroticos (2, 7, 8).
Silymarin, uma mistura de flavonolignans que exibem muitas atividades farmacológicas, é obtida a partir das sementes de cardo de leite (Silybum marianum L. Gaertner). Os procedimentos comuns utilizados até agora para a extração de silymarin baseiam-se principalmente em métodos lentos de extração de solventes de alta temperatura. As desvantagens associadas a essas técnicas levaram à busca de novos processos alternativos de extração que, adicionalmente, poderiam melhorarextratos de silymarinQualidade. Este último é particularmente importante no que diz respeito à aplicação de silymarin. Os extratos de silymarina obtidos, de fato, poderiam conter resíduos orgânicos tóxicos que precisam ser removidos para atender à aceitabilidade do consumidor.
Na tentativa de melhorar o processo de extração de silymarin e torná-lo mais eficaz e ecologicamente correto, recentemente a extração de solventes assistidos por micro-ondas, extração de solvente assistido por ultrassom, extração de líquido pressurizado, extração assistida por enzimas, extração de fluidos supercríticos e especialmente extração de água subcrítica também conhecida como métodos de extração de água quente pressurizada foram desenvolvidos e aplicados.
Materiais e Métodos
Material vegetal
Frutas secas de S. marianum L. Gaertner foram compradas de uma farmácia local (Lublin, Polônia) no outono de 2011. Uma amostra representativa suficientemente grande do material vegetal (cerca de 500 g) foi moída e peneirada para obter o tamanho da partícula de 0,4 mm. Foram utilizadas porções precisamente pesadas do material para extrações.
Materiais e reagentes
O extrato seco padronizado de S. marianum L. Gaertner e silybin B (com pureza de 98%), aplicado como padrão, foi adquirido da Sigma-Aldrich, Polônia. Acetona, acetato de etila, ácido fosfórico, n-hexano (todos de grau reagente analítico) e metanol (grau de reagente analítico e grau HPLC) foram comprados da Planta Química Polonesa (POCh, Gliwice, Polônia). A água foi purificada usando um sistema Milli-Q de Millipore (Millipore, Bedford, MA, EUA). O vidro neutro, obtido como presente de vidros locais (fração de 0,4 a 0,6 mm), foi aplicado como agente dispersor na célula PLE.
Extração líquida pressurizada
PLE foi realizado com um instrumento Dionex ASE200 (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, USA). O material vegetal (0,5 g) foi misturado com material inerte (vidro neutro) e colocado em uma célula de extração de aço inoxidável de 22 mL contendo papel filtro na parte inferior. Outro círculo de papel filtro foi colocado no topo da célula de extração. Finalmente, a célula foi bem fechada e colocada no forno de aquecimento.
O conteúdo da célula foi extraído na pressão operacional de 60 bar. Ao final do processo, a amostra extraída foi lavada utilizando o volume de solvente equivalente a 60% da célula de extração. Finalmente, a amostra foi purgada para 60 s aplicando nitrogênio pressurizado (150 psi.), e o extrato foi coletado em um frasco de vidro de 60 mL com uma tampa de borracha revestida de Teflon. O volume do extrato coletado foi entre 25 e 31 mL, dependendo da densidade de embalagem da célula de extração. O extrato obtido foi transferido para um frasco volumoso de 50 mL e preenchido até o seu volume usando um tipo de solvente apropriado. Três extrações independentes foram realizadas nas mesmas condições. Entre as corridas, o sistema foi lavado com um solvente de extração apropriado.
Os parâmetros PLE em estudo foram tipo solvente (metanol, acetona e acetato etílico), temperatura (50, 75, 100, 125 e 150°C), tempo (5, 10, 15 e 20 min) e número de ciclos de extração (1-5). Para o processo de desgorduração ple, n-hexano foi aplicado como solvente, e os parâmetros em estudo foram temperatura (50 e 100°C) e tempo (5 e 10 minutos) de remoção de lipídios. Extratos de acetona e acetato etílico foram evaporados para ressecamento sob vácuo e redissumatados em metanol antes da análise cromatógráfica.
Extração de Soxhlet
Extrações exaustivas no aparelho Soxhlet foram realizadas utilizando porções de 2,0 g do material. Amostras precisamente pesadas foram transferidas para um dedal de papel. O dedal carregado foi inserido em um extrator Soxhlet de 100 mL. As extrações foram realizadas no processo de duas etapas (n = 3). Na primeira etapa do procedimento, o material vegetal foi desgortado por 6h utilizando 75 mL de n-hexano. No segundo, a silymarina foi extraída por 5h com 75 mL de metanol. Após o resfriamento à temperatura ambiente, o extrato obtido foi transferido para um frasco volumoso de 100 mL, que foi posteriormente preenchido até o seu volume com metanol. Foram realizadas três extrações independentes.
Análise cromatográfica de extratos
As medições do HPLC foram realizadas em um Cromatógrafo Líquido Dionex (Dionex Corp.) composto por um gabinete de cromatografia (LC20) contendo uma válvula de injeção automatizada PEEK equipada com um loop de amostra de 10- μL, uma bomba de gradiente (GP50), um detector de absorção (AD25) e um detector de matriz de fotodiodo (PDA100). Todo o sistema cromatográfico estava sob o controle do sistema de aquisição de dados PeakNet6. As separações cromatográficas foram realizadas a 40°C usando uma coluna Prodigy ODS-2 (5 μm, 250 × 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Fase móvel A foi uma mistura de metanol com solução de ácido fosfórico aquoso contendo 0,5 mL de ácido fosfórico de 75% em 100 mL de solução (35 : 65, v/v). A fase B móvel foi uma mistura de metanol com a solução de ácido fosfórico aquoso contendo 0,5 mL de ácido fosfórico de 75% em 100 mL de solução (50 : 50, v/v). A vazão foi de 0,8 mL/min. As análises foram realizadas em gradiente de fase móvel com o percentual de B em A variando da seguinte forma: concentração inicial, 0%B; 28 min, 100%B; 35 min, 100%B, 36 min 0%B. Antes da análise seguinte, a coluna foi equilibrada utilizando a fase móvel contendo 0%B por 20 min. Cada extrato foi analisado pelo HPLC três vezes. O comprimento de onda para detectar flavonolignans foi estabelecido em 288 nm, e o espectro UV-Vis de 210 a 500 nm também foi registrado para caracterização de pico.
A análise qualitativa dos extratos foi realizada comparando-se os tempos de retenção dos picos e seus espectros UV-Vis nos extratos em relação aos da amostra padronizada de silymarina seca. Para preparar a solução padronizada de silymarina seca, uma porção de 0,02 g da amostra contendo 5,0 mg de silybin A + B foi dissolvida em 50 mL de metanol. Os picos de silycrirista, silydiaína, silybin A, silybin B, isosilybin A e B apareceram nos tempos de retenção de 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 e 34,8 min, respectivamente. A análise quantitativa foi baseada no padrão silybin B e foi utilizado método padrão externo. Uma curva de calibração foi gerada a partir de cinco concentrações do composto na faixa de concentração de 0,1-1,0 mg/mL. Foram realizadas três medições de área de pico para cada concentração de solução padrão. Os parâmetros característicos da curva de calibração obtida foram os seguintes: inclinação, 0,516 e interceptação, 0,003. A curva de calibração foi encontrada como linear na faixa de concentração testada. O coeficiente de correlação foi encontrado >0.995. Devido à dificuldade de compra de silycrina, silydiano, silybin A, isosilybin A e B, as quantidades desses compostos foram calculadas relacionando suas respostas cromatográficas à curva de calibração para silybin B.
Análise estatística
Todos os dados são expressos como ± desvio padrão (SD). A análise da variância (ANOVA) e do teste F foram utilizadas para avaliar a influência das condições do PLE no rendimento da silymarina. Os valores médios foram considerados significativamente diferentes quando o resultado dos parâmetros comparados diferiu em P = 0,05 nível de significância. Para verificar a significância de cada coeficiente de Fisher, foram utilizados os valores P.
Resultados
A Figura 1a apresenta cromatograma típico de extrato PLE obtido a partir dos frutos de S. marianum L. Gaertner, enquanto a Figura 1b mostra o cromatograma da extração de silymarina a partir da solução de cardo de leite preparada dissolvendo o extrato seco padronizado de S. marianum L. Gaertner em metanol (1 mg/mL). A análise de cromatógramas de extratos de PLE ou Soxhlet com a solução padronizada (tempos de retenção, espectro UV-Vis e índice de pureza de pico) comprovou que as condições cromatográficas aplicadas permitem uma resolução suficiente dos compostos examinados, picos numerados de 1 a 6, a partir de componentes da matriz amostral. Os picos foram identificados como: (1) silycrina, (2) silydianin, (3) silybin A, (4) silybin B, (5) isosilybin A e (6) isosilybin B, respectivamente.
Como extrair cardo de leite?
Ao contrário da maioria das ervas, as sementes de cardo de leite não extraem bem na água, então não tente fazer uma xícara de chá com elas! Em vez disso, coma as sementes moídas frescas, ou obtenha uma cápsula de boa qualidade. Se usar as sementes, compre-as inteiras e depois triture-as conforme necessário (uso um moedor de café para transformá-las em pó grosseiro). As sementes têm gosto oleoso, doce e amargo de uma só vez — talvez sejam um sabor adquirido, mas não são desagradáveis. Comece com tomar 1/2 a 1 colher de sopa por dia polvilhado em sua comida e veja como se sente para você, ajustando a quantidade que você precisa.
Ingredientes
1 xícara de água morna
1 xícara 100 álcool à prova eu uso vodca
3/4 a 1 xícara de leite sementes de cardo, se possível
Instruções
Esterilize o frasco de Mason sendo usado colocando-o em água fervente por aproximadamente 10 minutos, ou colocando-o no rack no forno a cerca de 250 graus por 15 minutos.
Despeje todos os ingredientes em um pote de Mason.
Coloque uma tampa nova no frasco e enrosque-a firmemente com um anel.
Agite o frasco vigorosamente por cerca de 1 minuto.
Coloque o pote em um lugar escuro e frio por cinco semanas.
Agite o frasco diariamente para garantir que as sementes de cardo de leite não flutuem até o topo, e fique totalmente infundida com o álcool e a água.
No final do número designado de semanas, coe o cardo de leite longe do líquido através de um coador de malha fino – mantendo o líquido. Se você não tiver um coador de malha fino, use um pequeno coador e/ou forrar um coador com vários filtros de café para diminuir o tamanho das aberturas.
Quanto tempo para o cardo de leite fazer efeito?
Sementes de cardo de leite podem proteger células hepáticas de produtos químicos tóxicos e drogas. Também parece ter efeitos de redução de açúcar no sangue, antioxidantes e anti-inflamatórios.
A melhora nos parâmetros de estresse oxidativo foi consistentemente observada na duração de seis meses de tratamento com um sistema especializado de entrega de cardos de leite (2). A melhora nos padrões de estresse oxidativo é responsável pela melhora da sinalização de insulina e do funcionamento das células hepáticas.
Quanto tempo deve ser levado cardo de leite? (Dosagem de cardo de leite)
O cardo de leite é considerado seguro em doses de 420 mg/dia oralmente em doses divididas por até 41 meses. Uma fonte sugere doses diárias de 12 a 15 g de frutas secas para dispepsia e distúrbios do sistema biliar, enquanto um extrato contendo 200 a 400 mg/dia de silymarin é considerado eficaz em vários distúrbios hepáticos.
Benefícios do cardo de leite
1. Suporta a saúde hepática
Um dos usos mais comuns do cardo de leite é tratar problemas hepáticos. Um estudo de 2016 descobriu que o cardo de leite melhorou os danos hepáticos induzidos pela dieta em camundongos. Mais evidências são necessárias para provar que o cardo de leite beneficia fígados humanos da mesma forma. No entanto, os pesquisadores teorizam que sim. O ingrediente ativo no cardo de leite, silymarin, atua como um antioxidante reduzindo a produção radical livre. Os cientistas acham que isso cria um efeito desintoxicante, e é por isso que é cardo de leite pode ser benéfico para problemas hepáticos.
Até que mais pesquisas seja realizada, no entanto, o cardo de leite não é recomendado como a principal opção de tratamento para problemas hepáticos. Mas pode ser um tratamento complementar útil para tentar.
2. Promove a saúde da pele
O óleo de cardo de leite pode ser usado topicamente para melhorar a saúde da pele.
Cardo de leite pode ajudar a promover a pele saudável. Um estudo de 2015 descobriu que o cardo de leite ajudou a melhorar as condições inflamatórias da pele quando aplicado na pele de camundongos.
Também foi encontrado cardo de leite com efeitos antioxidantes e anti-envelhecimento nas células da pele humana em um ambiente laboratorial em outro estudo.
Mais pesquisas em humanos são necessárias para identificar quais benefícios uma pessoa pode esperar da aplicação de cardo de leite em sua pele.
3. Reduz o colesterol
O colesterol alto pode levar a problemas de saúde cardíaca e aumentar a chance de derrame de uma pessoa.
Um estudo de 2006 sugere que o cardo de leite pode desempenhar um papel importante para manter os níveis de colesterol baixos. Descobriu-se que os níveis de colesterol eram mais baixos em pessoas que tomavam cardo de leite para tratar diabetes do que aqueles que tomavam um placebo.
4. Suporta a perda de peso
Pesquisas iniciais em animais realizadas em 2016 descobriram que a silymarin causou perda de peso em camundongos que foram alimentados com uma dieta destinada a causar ganho de peso.
Isso sugere que o cardo de leite pode ser benéfico para quem quer perder peso. Mais pesquisas sobre os efeitos do cardo de leite na perda de peso em humanos são necessárias para confirmar isso, no entanto.
5. Reduz a resistência à insulina
Um estudo em camundongos descobriu que o extrato de cardo de leite ajudou a reduzir a resistência à insulina. A resistência à insulina é um problema para pessoas com diabetes tipo 2.
Embora esta pesquisa sugira que o cardo de leite possa desempenhar um papel no gerenciamento do diabetes, mais pesquisas são necessárias para confirmar se o cardo de leite reduz a resistência à insulina e apoia o manejo do diabetes.
6. Melhora os sintomas de asma alérgica
O ingrediente ativo no cardo de leite pode ajudar a reduzir a inflamação. Um estudo de 2012 descobriu que a silymarina ajudou a proteger contra inflamações nas vias aéreas de camundongos com asma alérgica.
Mais pesquisas são necessárias para ver se a silymarina beneficia os sintomas da asma em humanos.
7. Limita a propagação do câncer
Cardo de leite pode ajudar a parar a propagação de certos tipos de câncer. Uma revisão de 2016 descobriu que o extrato de cardo de leite inibiu o crescimento de células cancerosas no câncer colorretal.
Mais pesquisas são necessárias para determinar como o cardo de leite pode ser usado para ajudar a combater o câncer.
8. Apoia a saúde óssea
O chá de cardo de leite pode ajudar a prevenir a perda óssea causada pela falta de estrogênio. Cardo de leite pode desempenhar um papel essencial no apoio à saúde óssea. Um estudo de 2013 descobriu que o cardo de leite ajudou a prevenir a perda óssea. O estudo analisou especificamente a perda óssea causada por uma deficiência no estrogênio. Ainda não está claro se o cardo de leite é igualmente benéfico para a perda óssea com uma causa diferente. Mais estudos são necessários antes que seja seguro concluir que o cardo de leite suporta a saúde óssea em humanos.
9. Melhora a cognição
Um estudo de 2015 descobriu que o cardo de leite aumentou a resistência ao estresse oxidativo. O estresse oxidativo é uma causa potencial da doença de Alzheimer.
Desta forma, o cardo de leite pode ajudar a melhorar a cognição e tratar condições degenerativas que afetam a mente. Mais pesquisas em humanos são necessárias para confirmar os efeitos do cardo de leite na cognição.
10. Impulsiona o sistema imunológico
Cardo de leite pode ajudar a fortalecer a resposta imune de uma pessoa e ajudá-lo a combater a infecção.
Um estudo de 2016 sobre um modelo animal descobriu que o extrato de cardo de leite melhorou a imunidade quando consumido. Um estudo mais antigo descobriu que o extrato de cardo de leite teve um efeito positivo na resposta imune em humanos.
Mais estudos com participantes humanos são necessários antes que os cientistas possam dizer com certeza que o cardo de leite impulsiona o sistema imunológico de uma pessoa.
Efeitos colaterais do cardo de leite
Cardo de leite parece ter poucos efeitos colaterais, mesmo quando tomado por vários anos. Algumas pessoas têm náuseas, diarreia, coceira e inchaço.
Para o cardo de leite a granel em pó, entre em contato conosco emherbext@undersun.com.cn
Referências:https://academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle